Влияние тромбоцитарной аутоплазмы на местный иммунитет при лечении ран у лошадей в эксперименте

Еще фото

Автор (ы):  В.А. Гусева, к.в.н., ассистент кафедры фармакологии Б.С. Семенов, д.в.н., профессор кафедры акушерства и оперативной хирургии Т.Ш. Кузнецова, к.б.н., ассистент кафедры ветеринарной генетики и животноводства
Организация(и):  ФГБОУ ВО «СПбГАВМ»
Журнал:  №2 -2017

УДК: 617-001.4:615.382:636.1

В статье рассматривается влияние лечения кожных экспериментальных ран у лошадей с применением тромбоцитарной аутоплазмы, полученной по технологии Plasmolifting – Animal, на количество иммунокомпетентных клеток кожи. Определено, что количественное соотношение Т-лимфоцитов (CD3+-клетки) и B-лимфоцитов (СD20+-клетки) биоптатов раневой поверхности подопытной группы животных на 11-е сутки комплексного лечения с применением тромбоцитарной аутоплазмы соответствует клеточному составу здоровой кожи. При этом в биоптатах раневой поверхности контрольной группы были выявлены избыточные скопления как В-, так и Т-лимфоцитов, что демонстрирует наличие выраженного воспалительного процесса. Использование тромбоцитарной аутоплазмы более эффективно по сравнению с общепринятым методом лечения в связи с активацией регенеративных процессов. Также, кроме ускоренной репарации поврежденных тканей, отмечается противовоспалительный эффект, основанный на биологическом действии тромбоцитарной аутоплазмы.

Summary

The article examines the impact of the experimental treatment of skin wounds in horses using platelet autoplasma (obtained by Plasmolifting technology – Animal) at the number of immunocompetent cells of the skin. It was determined that the proportion of T-lymphocytes (CD3+-cells) and B-lymphocytes (CD20+-cells) of the wound surface biopsies of experimental animal group at 11th day of treatment with a complex of platelet cell composition corresponds autoplasma healthy skin. Thus a surplus accumulation of B- and T-lymphocytes were found in the control group biopsies wound surface, which demonstrates the presence of pronounced inflammation. Using platelet autoplasma more efficiently compared with the conventional method of treatment due to the activation of regenerative processes. Also, in addition to rapid repair of damaged tissue, it marked anti-inflammatory effect, based on the biological action of platelet autoplasma.

  Введение

Применение тромбоцитарной аутоплазмы в медицинской практике основывается на том, что за счет высвобождения многочисленных различных факторов роста и других биологически активных молекул наблюдается активация процессов регенерации и восстановление поврежденных участков тканей. В гуманной медицине тромбоцитарную аутоплазму используют в косметологии, стоматологии, гинекологии, при лечении остеоартрозов [1, 4].

В ветеринарной практике применяли богатую тромбоцитами плазму с получением положительных результатов. При длительно незаживающих ранах конечностей у лошадей после лечения аутоплазмой в биопсийных препаратах были выявлены в большем количестве плотные пучки коллагена, ориентированные параллельно друг другу и вышележащему эпителию, в то время как в контрольных образцах тканей определяли меньшее количество коллагеновых волокон, ориентированных случайным образом [7]. Было определено, что применение богатой тромбоцитами плазмы способствует формированию сухожилия с нормальной морфологией и функциональностью без каких-либо серьезных побочных реакций [6].

К противопоказаниям применения собственной плазмы пациента можно отнести злокачественные новообразования, системные заболевания крови, аллергическую реакцию на коагулянт [1].

Следовательно, при показаниях тромбоцитарная аутоплазма может быть рекомендована к применению как стимулирующий регенерацию и противовоспалительный препарат.

При нарушении барьерно-защитных функций кожного покрова с целью предотвращения проникновения патогенов запускаются многоступенчатые восстановительно-регенеративные процессы, тесно связанные с функционированием клеток иммунной системы. Иммунологическая функция кожи в основном реализуется за счет различных популяций лимфоцитов (90% из них приходится на Т-лимфоциты, 10% – на В-лимфоциты). Лимфоциты способны к миграции из кровеносного русла или лимфатического сосуда в кожу, а также обладают аффинитетом к дерме, часть из них задерживается в ней, чтобы участвовать в иммунных реакциях [2, 3, 5].

В связи с вышесказанным представляет интерес определение содержания иммунокомпетентных клеток кожи при использовании тромбоцитарной аутоплазмы в сравнении с общепринятым методом лечения.

Материалы и методы

Использовали две группы лошадей (контрольную и подопытную), в каждой группе было по 10 животных, кобылы и мерины в возрасте 5–10 лет, беспородные. Раны наносили в средней трети шеи, площадью 5 см2, предварительно подготовив операционное поле.

Тромбоцитарную аутоплазму получали по технологии Plasmolifting – Animal. Подопытной группе животных ежедневно наносили мазь «Левомеколь» и вводили тромбоцитарную аутоплазму в объеме 3 мл под дно раневой поверхности 1 раз в 3 суток, всего было сделано 4 процедуры. Раневую поверхность контрольной группы лошадей ежедневно обрабатывали только мазью «Левомеколь». Биоптаты раневой поверхности от животных обеих групп отбирали на 11-е сутки лечения и проводили иммуногистохимическое исследование для выявления Т-лимфоцитов (CD3+-клетки) и B-лимфоцитов (СD20+-клетки). Также оценивали биоптаты здоровой кожи средней трети шеи животного. С целью  определения В-лимфоцитов используют метод розеткообразования с эритроцитами, которые обработаны антителами и комплементом EAC-РОК (с эритроцитами мыши). Для выявления Т-лимфоцитов используют метод спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана.

Результаты и обсуждение

В подопытной группе лошадей при использовании тромбоцитарной аутоплазмы в комплексе с мазью «Левомеколь» в биоптатах раневой поверхности при иммуногистохимическом окрашивании CD20+-клетки не обнаруживаются, заметны единичные CD3+-клетки в дерме, около 8–10 CD3+-клеток в поле зрения в базальном слое эпидермиса. Такую же картину наблюдали при иммуногистохимическом окрашивании биоптатов здоровой кожи. В контрольной группе лошадей при использовании только мази «Левомеколь» в результате иммуногистохимического окрашивания биоптатов раневой поверхности в базальном слое эпидермиса выявляются единичные CD3+-клетки, в дерме и на участках воспалительного гнойного процесса сильная инфильтрация CD3+-клетками, при полуколичественном анализе – около 60% от объема клеточного инфильтрата. В участках с менее выраженным воспалением количество CD3+-клеток меньше, но они образуют лимфоидные скопления вблизи сосудов. В этих скоплениях также обнаруживаются CD20+-клетки. В целом на препаратах выявляются множественные CD20+-клетки.

Из полученных данных видно, что при использовании тромбоцитарной аутоплазмы клеточный состав CD3+ и CD 20+ схож со здоровой тканью, в то время как в контрольной группе животных отмечено резкое увеличение обоих типов клеток, что говорит о наличии ярко выраженного воспалительного процесса.

        При иммуногистохимическом исследовании биоптатов здоровой кожи не было выявлено наличие B-лимфоцитов и было отмечено наличие единичных Т-лимфоцитов (рис. 1, 2).

На 11-е сутки лечения в биоптатах подопытной группы лошадей отсутствовали В-лимфоциты (рис. 3) и встречались единичные Т-лимфоциты (рис. 4), в то время как в биоптатах контрольной группы были выявлены множественные В- и Т-лимфоциты (рис. 5, 6).

Полученные данные свидетельствуют, что В- и Т-клеточный состав раневой поверхности подопытной группы животных соответствует клеточному составу здоровой кожи, при этом реакция с В-лимфоцитами отсутствовала и встречались единичные Т-лимфоциты. В биоптатах раневой поверхности контрольной группы лошадей были выявлены избыточные скопления как В-, так и Т-лимфоцитов, что демонстрирует наличие выраженного воспалительного процесса. Следует отметить, что результаты иммуногистохимического исследования коррелируют с данными, полученными при клиническом наблюдении за раневым процессом, при котором было установлено, что тромбоцитарная аутоплазма способствует купированию отечности и гнойного экссудата в ранах у лошадей.

Из проведенного исследования можно сделать вывод, что тромбоцитарная аутоплазма уменьшает выраженность воспалительной реакции, сокращает сроки заживления и может быть рекомендована как противовоспалительное средство при лечении ран у лошадей.

  Литература

1. Ахмеров Р.Р. Применение аутоплазмы, содержащей тромбоциты, в дерматокосметологии и стоматологии / Р.Р. Ахмеров, О.И. Короткова, М.В. Овечкина, Р.Ф. Зарудий, А.А. Воробьев. Пластическая хирургия и косметология. 2013; 1: 94–105. Электронный ресурс: https://docviewer.yandex.ru/?url=http%3A%2F%2Fwww.pscj.ru%2Fupload%2Fiblock%2Fc88%2F9.pdf&name=9.pdf&lang=ru&c=58a18a7ea0f2&page=1 . Дата обращения 14.02.2017.

2. Базарный В.В. Иммунная система кожи / В.В. Базарный.Мезотерапия. 2011; 2 (14). Электронный ресурс: https://www.martinex.ru/publications/meso-journal/meso14/skin-immune-system.html. Дата обращения 13.02.2017.

3. Белова О.В. Иммунологическая функция кожи в свете новых данных / О.В. Белова, И.В. Зимина, Т.И. Торховская, Н.А. Никитина, В.И. Сергиенко.Российский иммунологический журнал. 2014; 8 (2): 143–151.

4. Емелин А.Л. Клиническая эффективность тромбоцитарной аутоплазмы при лечении остеоартрозов / А.Л. Емелин, И.Ф. Ахтямов. Вестник современной клинической медицины. 2013; 6 (1): 26–29.

5. Караулов А.В. Иммунология, микробиология и иммунопатология кожи / А.В. Караулов, Быков А.С., Быков С.А. . М.: Бином, 2012. 328 с.

6. Ковач М. Ортопедические заболевания лошадей: современные методы диагностики и лечения. М.: Королевский издательский дом, 2013. 610 с.

7. De Rossi R. Effects of platelet-rich plasma gel on skin healing in surgical wound in horses / R. De Rossi [et al.]  Acta Cir Bras. 2009; 24 (4): 276–81.

 

 

Здоровая кожа. Иммуногистохимическая реакция с СD 20 + клетками ( B лимфоциты). Реакция отсутствует. Увеличение 200 Контрольная группа. Иммуногистохимическая реакция с клетками CD 3 + (Т-лимфоциты) Выявлены множестаенные Т-лимфоциты. Увеличение 200
Назад в раздел