Цитология глубоких кожных инфекций
Цитология глубоких кожных инфекций
Еще фото

Автор (ы):  О.А. Глебова, ветеринарный врач-морфолог ветеринарной клиники «Биоконтроль»
Журнал:  №1 - 2018
Материалы 7-го IVDS, 9-10 марта 2018 г., СПб (организатор - научно практический журнал VetPharma)

Цитологическое исследование часто используется для обнаружения и идентификации инфекционных агентов. Некоторые из них являются первичной причиной поражения, а какие-то в норме обитают в организме животного и могут осложнять уже имеющуюся патологию. Инфекционные агенты важно отличать от артефактов. Размер микроорганизмов можно определять, сравнивая их с эритроцитом: размер эритроцита кошки 5 мкм, собаки – 7 мкм. Различные виды инфекционных агентов вызывают разные типы воспаления. Бактериальные воспаления часто (но не всегда) сопровождаются дегенерацией нейтрофилов. Глубокие, нодулярные поражения, как правило, характеризуются макрофагальным, гранулематозным (макрофаги, гигантские многоядерные клетки, эпителиоидные макрофаги) или пиогранулематозным (нейтрофилы, макрофаги, гигантские многоядерные клетки, эпителиоидные макрофаги) воспалением. Морфология макрофагов может значительно варьировать, а гигантские многоядерные клетки необходимо отличать от клеток злокачественного новообразования (в последнем случае будет отмечаться анизокариоз в пределах одной клетки).

Бактерии

Обычные кокковидные и палочковидные бактерии окрашиваются по Романовскому или Дифф-Квиком в синий цвет. Бактерии важно отличать от контаминации краской, от гранул меланина, от гранул из разрушенных эозинофилов и мастоцитов (по цвету, размеру, расположению в фокусе или не в фокусе препарата). Вид бактерий устанавливается только по результатам бактериологического посева. Филаментные бактерии имеют вид тонких нитей с морфологией «точка-тире» рис. 1). К ним относят представителей Actinomyces и Nocardia. Микобактерии окрашиваются негативно стандартными красителями (то есть не окрашиваются, рис. 3) и требуют окраски по Цилю-Нильсену (на кислотоустойчивые бактерии, рис. 2). Окраска для подтверждения наличия микобактерий необходима, потому что похожим образом могут выглядеть кристаллы холестерина или артефакты [рис. 4, рис. 5, рис. 6]. В мазках с кожи из областей, прилегающей к ротовой полости, можно обнаружить бактерии Simonsiella – палочковидные бактерии, располагающиеся параллельно друг другу в виде отпечатка подошвы. Обнаружение их в других локализациях (спина, живот, конечности) будет указывать на то, что животное вылизывается.

Нейтрофильное воспаление с нитевидными бактериями: значительное количество дегенеративных нейтрофилов, единичные макрофаги и плотная крупная группа (мат) тонких нитевидных бактерий. В правом верхнем углу – фрагмент клетки плоского эпителия с наложением нитевидных бактерий, в которых хорошо видна морфология «точка-тире».

Грибы

Артроспоры дерматофитов

Можно обнаружить расположенными на поверхности клеток плоского эпителия или лежащими свободно. Это округлые, овальные или бобовидные структуры с тонкой капсулой размером 2-4 мкм.

Гистоплазмоз: Histoplasma capsulatum

Организмы обнаруживаются свободно лежащими, а также в фагоцитированном состоянии – обычно внутри макрофагов (как на фотографии), иногда – нейтрофилов. Это округлые или чуть овальные грибы размером 2-4 мкм, имеющие тонкое гало светло-синего цвета и эксцентрически расположенное эозинофильное или метахроматическое ядро.

Споротрихоз: Sporothrix schenckii

Грибы округлой, овальной или сигароподобной формы. Последняя является их характерной чертой, и, если её не удаётся обнаружить, эти грибы сложно отличить от гистоплазм. Размер от 3-9 (длина) х 1-3 мкм (ширина). Светло-базофильные, с розовым или синеватым эксцентрично расположенным ядром.

Бластомикоз: Blastomyces dermatitidis

В отличие от предыдущих грибов, это крупные (8-20 мкм) микроорганизмы. Они округлые, тёмно-базофильные, с толстой стенкой. От криптококков отличаются тем, что между двумя дочерними клетками имеют толстое (широкое) соединение и не имеют капсулы.

Возбудителя часто можно найти в местах значительного скопления клеток воспаления.

Криптококкоз: Cryptococcus spp

Округлые крупные грибы, имеющие толстую капсулу, хотя могут встречаться и грибы без капсулы. Размер без капсулы варьирует от 5 до 15 мкм, с капсулой – от 8 до 40 мкм. Окрашиваются эозинофильно или метахроматически. Характерной чертой, помогающей дифференцировать криптококки от бластомицетов, является тонкая перемычка между двумя дочерними клетками – «осиная талия». Криптококки обнаруживаются как свободно лежащими, так и в фагоцитированном состоянии внутри макрофагов.

Феогифомикозы и гиалогифомикозы

Заболевания, вызываемые грибами с септированным мицелием, образующим мицелиальную форму в поражённых тканях. Феогифомицеты характеризуются тем, что в культуре содержат меланин в стенках гриба, в то время как гиалогифомицеты относятся к беспигментным грибам. Примерами могут служить Bipolaris, Exophiala, Alternaria, Curvularia. Для дальнейшей дифференцировки используются дополнительные методы (такие как посев и ПЦР). В цитологических препаратах при стандартных окрасках гифы могут окрашиваться, не окрашиваться или окрашиваться частично, поэтому их удобно искать в скоплениях клеточного детрита и клеток воспаления, на фоне которых они будут более заметны. Гифы могут быть ветвящимися или неветвящимися; в цитологическом описании отмечают толщину в микрометрах и наличие септ.

Другие интересные находки

Дирофиляриоз

Иногда в цитологические препараты может попасть материал из взрослой дирофилярии. На фотографии представлено содержимое матки: личинки и яйца.

В мазках из любого поражения могут обнаруживаться микрофилярии, но они попадают с кровью при контаминации и не указывают на то, что данное конкретное поражение обязательно связано с дирофиляриозом.

Демодекоз

В мазки из поражений кожи иногда попадают клещи рода Demodex, хотя цитология не является первичным способом диагностики демодекоза. Клещей можно обнаружить при сканировании препарата на увеличении с объективом х10. Они не окрашиваются, но хорошо заметны на фоне клеток воспаления и эритроцитов. В мазки могут попасть как взрослые особи, так и личинки или яйца.

Не стоит забывать о том, что нодулярные поражения не всегда вызываются микроорганизмами. Примерами неинфекционных причин могут служить реакция на вакцину, фолликулярная киста, кальциноз.

Литература

1.  Rick L. Cowell and Tara P. Arndt. Selected Infectious Agents. In: Rick L. Cowell, Ronald D. Meinkoth, Dennis B. DeNicola. Diagnostic Cytology and Hematology of the Dog and Cat. 4th ed.: Mosby Elsevier; 2014: 48-69.

2. Rose E. Raskin. Skin and Subcutaneous Tissues. In: ROSE E. R ASKIN, DENNY J. MEYER. 3rd ed.: Sounders; 2015: 34-54.

3. Foley JE, Borjesson D, Gross TL: Clinical, microscopic, and molecular aspects of canine leproid granuloma in the United States, Vet Pathol 39:234–239, 2002.

4. Albanese F, Abramo F, Braglia C, et al: Nodular lesions due to infestation by Dirofilaria repens in dogs from Italy, Vet Dermatol 24:255–e56, 2013.

5. Lester SJ, et.al: Cryptococcosis: update and emergence of Cryptococcus gattii, Vet Clin Path 40(1):4–17, 2011.

6. Pascal Anfray, Cristina Bonetti, Fabrizio Fabbrini, Simone Magnino, Francesca Mancianti and Francesca Abramo. Feline cutaneous toxoplasmosis: a case report. Veterinary Dermatology 2005, 16, 131–136.

7. Jennifer L. Scruggs, Casey J. LeBlanc. Identification of blue staining vaccine derived material in inflammatory lesions using cultured canine macrophages. Vet Clin Pathol 44/1 (2015) 152–156.

8. Bente K Sævik, Einar Jörundsson, Teresa Stachurska-Hagen, Kristoffer Tysnes, Hege Brun-Hansen, Henriette C Wikström and Lucy J Robertson. Dirofilaria repens infection in a dog imported to Norway. Acta Vet Scand. 2014; 56(1): 6.

9. Perusquía-Ortiz AM1, Vázquez-González D, Bonifaz A. Opportunistic filamentous mycoses: aspergillosis, mucormycosis, phaeohyphomycosis and hyalohyphomycosis. J Dtsch Dermatol Ges. 2012 Sep;10(9):611-21.

 

 

Нейтрофильное воспаление с нитевидными бактериями: значительное количество дегенеративных нейтрофилов, единичные макрофаги и плотная крупная группа (мат) тонких нитевидных бактерий. В правом верхнем углу – фрагмент клетки плоского эпителия с наложением ни Окраска по Цилю-Нильсену: четыре макрофага, два из которых содержат значительное количество положительно окрашенных палочковидных бактерий (микобактерий), которые также видны на фоне препарата Материал из лимфатического узла, окраска по Романовскому: макрофаг, несколько малых лимфоцитов, разрушенные клетки и значительное количество негативно окрашенных палочковидных бактерий. Окраска по Цилю-Нильсену [рис. 2.] Выпот в грудную полость животного с метастазами аденокарциномы, окраска по Романовскому: клетки новообразования, на одной из которых наблюдается артефакт: палочковидные неокрашенные структуры. Окраска по Цилю-Нильсену отрицательная (фотография не представ Выпот в грудную полость, окраска по Романовскому: макрофаги, нейтрофилы, малые лимфоциты; в некоторых макрофагах визуализируются палочковидные неокрашенные структуры Тот же выпот, окрашенный по Цилю-Нильсену: макрофаги, нейтрофилы; палочковидные структуры не окрасились. Так могут выглядеть кристаллы холестерина Дерматофиты Дерматофиты Гистоплазма Cпоротрихоз Бластомикоз Криптококки Дирофиляриоз Демодекоз
Назад в раздел