nvc866x136September.png

ЛАБОРАТОРНАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ КОМБИНАЦИИ ИМИДАКЛОПРИД 10% / МОКСИДЕКТИН 2,5% ДЛЯ НАРУЖНОГО ПРИМЕНЕНИЯ (АДВОКАТ®) В ОТНОШЕНИИ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ МИКРОФИЛЯРИЙ DIROFILARIA IMMITIS У СОБАК
ЛАБОРАТОРНАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ КОМБИНАЦИИ ИМИДАКЛОПРИД 10% / МОКСИДЕКТИН 2,5% ДЛЯ НАРУЖНОГО ПРИМЕНЕНИЯ (АДВОКАТ®) В ОТНОШЕНИИ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ МИКРОФИЛЯРИЙ DIROFILARIA IMMITIS У СОБАК


Автор (ы):  ДУАЙТ Д. БОУМЕН, СЭМЮЭЛ Д. ЧАРЛЬЗ, РОБЕРТ ДЖ. АРТЕР, ТЕРРИ СЕТТЬЕ
Организация(и):  Собачий питомник «Cheri Hill Kennel & Supply», Стэнвуд, штат Мичиган, США; Компания «Байер ХелсКэа», отдел ветеринарии, отдел клинических исследований, Шони, штат Канзас, США
Журнал:  №3 - 2018

на правах рекламы

Аннотация
В ходе данного исследования была оценена эффективность препарата на основе комбинации имидаклоприд 10% / моксидектин 2,5% для наружного применения (Адвокат®, «Байер») в отношении циркулирующих микрофилярий у собак со спонтанной инвазией Dirofilaria immitis. Исследование было проведено в двух группах по 11 собак и включало два опыта с повторным дизайном. В опыте 1 использовалось 12 собак (6 в группе лечения и 6 в контрольной группе), в опыте 2 использовалось 10 собак (5 в группе лечения и 5 в контрольной группе). Шесть из 10 собак в опыте 2 были взяты из контрольной группы опыта 1. Перед началом исследования у всех собак было проведено физикальное обследование, включавшее рентгенографию органов грудной клетки, были взяты образцы крови для анализа на наличие циркулирующих микрофилярий Dirofilaria immitis, биохимического исследования сыворотки крови и клинического анализа крови и проведен анализ мочи. Требованиями для участия в исследовании было наличие у каждой собаки среднего геометрического значения ≥ 300 микрофилярий на 1 мл крови в 3 последовательных образцах, взятых в течение 8-дневного периода акклиматизации, и дирофиляриоза сердца 1 или 2 степени. Собак обработали в дни исследования 0 и 28. Подсчет микрофилярий после обработки проводился в дни исследования 1, 2, 3, 7, 14, 21, 28, 29, 35 и 42. Процентное снижение числа микрофилярий определяли посредством сравнения геометрического среднего числа циркулирующих микрофилярий, оставшихся у собак в группе лечения, с соответствующим показателем у собак в контрольной группе. Через семь дней после первой обработки геометрическое среднее число микрофилярий у собак в группе лечения снизилось более чем на 99% в сравнении с собаками в контрольной группе. Снижение числа микрофилярий сохранялось на уровне > 99% вплоть до окончания исследования через 42 дня после первой обработки животных (14 дней после второй обработки). Результаты данного исследования доказали, что препарат Адвокат® для собак эффективен в отношении циркулирующих микрофилярий D. immitis у положительных по дирофиляриозу собак со спонтанной инвазией, при этом у собак не наблюдается нежелательных явлений, связанных с проводимым лечением.

Вводная информация
Уничтожение циркулирующих микрофилярий Dirofilaria immitis с одновременным или последующим введением адюльтицида играет важнейшую роль в улучшении клинического состояния собаки и снижении распространения дирофиляриозной инвазии (McCall и соавт.,2014). В инструкцию по использованию препарата для наружного применения Адвокат® для собак было добавлено следующее заявление: «предназначен для сокращения числа циркулирующих микрофилярий Dirofilaria immitis у положительных по дирофиляриозу сердца собак, а также для лечения и профилактики саркоптоза, вызванного Sarcoptes scabiei var. canis» (Supplemental NADA 141– 251, одо-
брено 24 октября 2013). Данная информация была добавлена к таким уже одобренным первоначальным заявленным свойствам препарата, как уничтожение взрослых блох, а также лечение и профилактика
нематодных инвазий, в т. ч. воздействие на личиночные стадии L4, неполовозрелых и половозрелых взрослых особей Ancylostoma caninum и Uncinaria stenocephala, личиночные стадии L4 и взрослых особей Toxocara canisToxascaris leonina и Trichuris vulpis. Инструкция по применению также включает ежемесячное использование препарата для профилактики развития сердечной формы дирофиляриоза у собак, вызываемого Dirofilaria immitis (Arther и соавт., 2005). Ранее уже были приведены подтверждающие данные (McCall и соавт.,2014) по лечению этим препаратом микрофиляриоза у собак, которым были трансплантированы взрослые особи D. immitis (Pepper strain, TRS Labs, Inc, Атенс, штат Джорджия, США). Кроме того, на клинических базах Алабамы, Луизианы, Миссури, Оклахомы, Теннесси и Техаса проводилось клиническое полевое исследование для дополнительной
оценки безопасности и эффективности, в котором препарат (отдельно и в сочетании с меларсомина дигидрохлоридом) применялся для устранения взрослых гельминтов (Supplemental NADA 141–251, одобрено 24 октября 2013). Целью описанного в данной статье исследования было проведение в лабораторных условиях оценки эффективности препарата Адвокат® для собак в отношении циркулирующих микрофилярий D. immitis при ми-
нимальной дозе, рекомендованной в инструкции по применению, (0,1 мл/кг массы тела) у собак со спонтанной дирофиляриозной инвазией.
Материалы и методы
Животные
Полученные из разных источников, лицензированных Министерством сельского хозяйства США (закон «О благополучии животных» (части 1, 2 и 3 9-го раздела Свода федеральных постановлений США (CFR) Министерства сельского хозяйства США), 22 (двадцать две) собаки, у которых до начала лечения было обнаружено адекватное среднее число циркулирующих микрофилярий (МФ) D. immitis, составлявшее ≥ 300 МФ в 1 мл крови, включили в исследование и рандомизированно разделили на две группы по 11 животных в каждой. Отбору животных предшествовал период акклиматизации в виварии продолжительностью не менее 8 дней. Наблюдение за состоянием здоровья животных проводилось один раз в день. В период акклиматизации был выполнен анализ мочи и взяты образцы крови для проведения биохимического исследования сыворотки, ОАК (общего клинического анализа крови), а также для подсчета циркулирующих МФ при помощи модифицированного метода Кнотта (Bowman, 2009). Кроме того, перед обработкой провели рентгенографию органов грудной полости и определили массу тела животных. Данные анализы и обследования использовались для определения степени дирофиляриоза у каждой собаки. В исследование были включены только собаки с дирофиляриозом сердца 1 или 2 степени (Американское
общество по борьбе с дирофиляриозом, 2012 г.; ветеринарный факультет университета штата Луизиана, 2015).
Собаки находились в клетках из нержавеющей стали в помещениях с управляемым микроклиматом. Площадь, отведенная каждому животному, отвечала соответствующим рекомендациям по обеспечению благополучия животных или нормативам, установленным Министерством сельского хозяйства США. Все клетки закрывались сверху. С целью предотвращения контакта между животными и перекрестного заражения между клетками установили полипропиленовые перегородки. Собаки ежедневно получали коммерческий корм, содержащий 21 % белка (корм River Run, «Каргилл Энимал Нутришн», штат Миннеаполис, США), вода предоставлялась в неограниченном количестве. Уборка в клетках производилась ежедневно. Температуру и относительную влажность в помещениях регистрировали один раз в день при помощи термометров «максимум-минимум» и портативного цифрового термогигрометра.
На протяжении всего периода исследования температура и относительная влажность соответствовали нормам. На каждой клетке был указан идентификационный номер (ИН) животного, номер опыта и пол животного. Освеще-ние обеспечивалось потолочными флуоресцентными лампами; автоматический таймер ежедневно обеспечивал примерно 12 часов светового периода и 12 часов темноты. Наблюдение за состоянием здоровья животных проводилось ежедневно, начиная с 8-го дня исследования (ДИ).
Содержание животных осуществлялось с должным вниманием к их благополучию и в соответствии с действующими законами, нормативными актами и инструкциями. Протокол исследования был утвержден Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию до начала исследования.
Данное исследование было проведено в соответствии с рекомендациями руководства VICH GL9 по надлежащей клинической практике и руководством FDA для промышленности 85 (май 2001).

Таблица 1. Данные о животных, массе тела и лечении, использованные для определения эффектов применения препарата
Адвокат® для собак или минерального масла в дни исследования 0 и 28
Группа лечения

ИН собаки*

Пол

День 1

Масса тела (кг)

Доза в день 0

(мл)

Масса тела в день 27 (кг)

Доза в день 28

(мл)

Адвокат® для собак

13584–1

Ж

12,70

1,27

12,05

1,21

 

13697–2

М

26,75

2,68

26,95

2,70

 

13734–2

М

26,35

2,64

25,80

         Н/П**

 

13777–2

Ж

31,25

3,13

30,0

3,00

 

13778–1

М

43,75

4,38

43,05

4,31

 

2167–1

Ж

31,00

3,10

30,75

3,08

 

2759–2

М

40,30

4,03

41,55

4,16

 

E7934–1

М

29,50

2,95

29,65

2,97

 

E7983–2

Ж

31,90

3,19

31,15

3,12

 

E7987–1

Ж

26,90

2,69

24,90

2,49

 

E7988–1

Ж

31,85

3,19

31,15

3,12

 

Минеральное масло

13680–1

Ж

24,95

2,50

24,55

2,46

 

13680–2

Ж

25,15

2,52

24,10

2,41

 

13697–1

М

28,20

2,82

27,00

2,70

 

13734–1

М

26,70

2,67

26,55

2,66

 

13792–2

М

28,70

2,87

26,80

2,68

 

2224–1

Ж

17,55

1,76

17,65

1,77

 

2224–2

Ж

17,35

1,74

17,75

1,78

 

2755–2

Ж

22,75

2,28

21,70

2,17

 

58101–1

М

20,45

2,05

23,45

2,35

 

58101–2

М

22,50

2,25

21,80

2,18

 

E7983–1

Ж

31,60

3,16

30,20

3,02

 * Идентификационный номер собаки + номер опыта

** Лечение не проводилось

План исследования

Данное исследование проводилось с использованием двух опытов с повторным дизайном. Опыт 1 включал 12 собак. Опыт 2 включал 10 собак (6 из которых были взяты из контрольной группы после завершения опыта 1) (Таблица 1). Все собаки прошли физикальное обследование и взвешивание в период акклиматизации: в ДИ -7 в опыте 1 и ДИ -8 в опыте 2. В ДИ -1 животных в случайном порядке разделили на две экспериментальные группы по среднему числу МФ до начала лечения. У каждой собаки до начала лечения трижды проводился подсчет МФ с использованием модифицированного метода Кн на ДИ -6, -5 и -4 (опыт 1) и в ДИ -8, -7 и -6 (опыт 2) (Таблица 2).

Таблица 2. Число микрофилярий в 1 мл крови у собак, обработанных препаратом Адвокат® для собак или минеральным маслом, до и после лечения. Первая обработка была проведена в день 0, вторая — в день 28


   

 

 

 

 

 

 

День до или после обработки

 

 

 

 

 

 

Собака - опыт

-8

-7

-6

-5

-4

Среднее

значение

до лечения

1

2

3

7

14

21

28

29

35

42

Число микрофилярий на 1 мл крови

Адвокат®для собак

13584–1

*

*

4400

9000

3250

5550

 

12800

9850

6900

65

4

0

0

0

0

0

13697–2

7400

1650

6900

*

*

5317

 

6750

9850

6500

30

4

2

12

*

3

0

13734–2

2650

1800

2650

*

*

2367

 

3150

400

57

35

9

8

9

*

*

*

13777–2

16650

28800

42950

*

*

29467

 

24300

3600

750

105

42

40

29

*

14

0

13778–1

*

*

1000

1550

750

1100

 

1200

600

200

0

0

0

0

0

0

0

2167–1

*

*

2250

1800

11 650

5233

 

2050

3200

3200

75

0

4

14

9

6

17

2759–2

8650

5650

6750

*

*

7017

 

2950

100

54

1

0

0

0

*

0

0

E7934–1

*

*

10 650

7000

12 700

10 117

 

8450

4000

3000

27

0

0

0

1

0

0

E7983–2

8550

2700

4650

*

*

5300

 

15 050

6950

7700

648

75

17

30

*

19

0

E7987–1

*

*

550

1900

600

1017

 

200

450

350

0

0

0

0

0

0

0

E7988–1

*

*

1350

2750

41 000

15 033

 

1050

1050

1450

9

0

0

0

0

0

0

Плацебо

13680–1

*

*

15 700

9600

15 900

13 733

 

18 050

28 550

10 600

14 800

10 200

22 950

18 250

11 700

37 750

10 800

13680–2

27 900

18 900

5550

*

*

17 450

 

32 850

36 900

36 450

33 600

42 750

34 200

27 450

*

28 550

27 450

13697–1

*

*

9250

17 400

3450

10 033

 

7250

5250

5450

6200

5850

5600

9250

4700

4400

9450

13734–1

*

*

1100

1900

5850

2950

 

1200

4500

850

4000

1000

2750

1500

3050

1150

1500

13792–2

31 500

31 050

38 200

*

*

33 583

 

62 100

27 000

23 450

16 200

36 450

22 950

23 400

*

18 550

21 150

2224–1

*

*

1700

3500

25 900

10 367

 

2800

7450

5900

3450

1950

3100

1450

750

2500

11 700

2224–2

1900

3950

3800

*

*

3217

 

4250

3900

5600

4000

3900

5400

6000

*

6850

5800

2755–2

1400

7250

8700

*

*

5783

 

9300

10 300

2300

7100

3550

4950

5350

*

4900

2000

58101–1

*

*

500

650

600

583

 

500

500

500

200

200

250

200

450

550

300

58101–2

350

450

700

*

*

500

 

350

250

700

600

700

550

600

*

450

250

E7983–1

*

*

900

10 800

1100

4267

 

1250

2150

1400

350

1250

1750

7300

5400

5350

3550

* подсчет числа микрофилярий не проводился в эти дни у этих собак.

 

Собак со средним числом микрофилярий до начала лечения не менее 300 МФ/мл, которые также соответствовали иным критериям включения, ранжировали по убыванию среднего числа МФ до начала лечения. Первые две собаки (наибольшие значения) были определены в блок 1, следующие две собаки были определены в блок 2 и т. д.; последние две собаки (наименьшие значения) были определены в шестой блок опыта 1.

Собак со средним числом микрофилярий до начала лечения не менее 300 МФ/мл, которые также соответствовали иным критериям включения, ранжировали по убыванию среднего числа МФ до начала лечения. Первые две собаки (наибольшие значения) были определены в блок 1, следующие две собаки были определены в блок 2 и т. д.; последние две собаки (наименьшие значения) были определены в шестой блок опыта 1.

Тот же метод распределения использовали в опыте 2 для формирования блоков 1–5.

В обоих опытах животных из группы 1 (собаки, получающие лечение) дважды обработали (один раз в ДИ 0 и один раз в ДИ 28) препаратом Адвокат® для собак в минимальной дозе, рекомендованной в инструкции по применению (0,1 мл/кг массы тела).

Животных из группы 2 (контрольные собаки) дважды обработали в каждом опыте (один раз в ДИ 0 и один раз в ДИ 28) минеральным маслом в объеме, эквивалентном объему препарата Адвокат® для собак, чтобы использовать данный способ обработки в качестве отрицательного контроля и маскировать лечение, используемое в двух разных группах. В ДИ 27, перед второй обработкой (ДИ 28), животных повторно взвесили (таблица 1).

В ДИ 0 и 28 собак обследовали через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 12 и 24 часа после обработки. Во все остальные дни исследования после начала лечения собак обследовали один раз в день. Задействованный в исследовании персонал, ответственный за соблюдение техники безопасности и оценку эффективности, не был осведомлен о распределении собак по группам лечения. Образцы крови для подсчета МФ собрали в ДИ 1, 2, 3, 7, 14, 21, 28, 29, 35 и 42.

Подсчет числа микрофилярий

Подсчет числа микрофилярий проводился с использованием модифицированного метода Кнотта (Bowman, 2009). Сразу после посева по Кнотту объем содержимого пробирки доводили до 1 мл 2-процентным раствором формалина. Затем из 1 мл смеси отбирали пробы объемом 20 мкл, которые исследовали на наличие микрофилярий, и если обнаруживали МФ, то их число умножали на 50, чтобы получить число микрофилярий в 1 мл. Если МФ отсутствовали, исследовали еще 100 мкл, и в случае обнаружения МФ их число умножали на 8,33, чтобы определить число МФ в 1 мл. Если в первых 120 мкл смеси не наблюдалось ни одной МФ, то исследовали весь осадок и общее число обнаруженных МФ считали за число МФ на 1 мл.

Анализ данных

Процентное снижение числа МФ определяли посредством сравнения геометрического среднего числа циркулирующих МФ, оставшихся у собак в группе 1, с числом МФ, оставшихся у собак в группе 2, в ДИ 1, 2, 3,

7, 14, 21, 28, 35 и 42 после обработки. Представленная на рисунке 1 диаграмма со средними значениями и 95 % доверительными интервалами была построена с помощью программы Prism (версия 6.04 от 17 января 2014 г., «GraphPad Software, Inc.»).

Анализ включал многоуровневую оценку с использованием результатов подсчетов числа микрофилярий в образцах, собранных в ДИ 28 и 42. Согласно принятому допущению, число МФ в образцах, собранных в эти два дня у обработанных препаратом животных, снизится на 90 % или больше в сравнении с животными в контрольной группе. Для статистических сравнений результаты подсчетов числа микрофилярий преобразовали [log(число+1)] и обработали при помощи ковариационного анализа (ANCOVA), включавшего параметры лечения (ПЛ) (фиксированные эффекты), блок и животное (случайные эффекты), при этом в качестве ковариаты использовали среднее значение log(число до начала лечения+1). Анализ выполнили при помощи программного обеспечения SAS PROC MIXED (SAS® версия 9.2, SAS Institute®, Кэри, штат Северная Каролина, США). Была выполнена оценка основного эффекта ПЛ. Сравнения между группами лечения проводились при помощи анализа LSMEANS (p ≤ 0,05, двусторонний ДИ).

Для того чтобы обеспечить существенное доказательство эффективности препарата для наружного применения Адвантейдж® Мульти для собак в лабораторных условиях, требовалось процентное снижение числа микрофилярий на 90 % или больше и статистически значимое различие между контрольной группой и группой лечения в ДИ 42 и (или) 28; также не менее шести животных из контрольной группы должны были иметь адекватное значение инвазии (≥ 300 МФ/мл) в ДИ 42 и (или) 28.

Оценка эффективности основывалась на процентном снижении среднего числа МФ у собак, обработанных препаратом Адвокат® для собак, в сравнении с собаками в контрольной группе, обработанными минеральным маслом, при каждом подсчете числа МФ после начала обработки. Процентный показатель эффективности (или процентное снижение числа МФ) определяли путем сравнения среднего геометрического числа МФ, подсчитанного для групп собак, обработанных ИВП, со средним геометрическим числом МФ, подсчитанным для  групп контрольных собак, при помощи формулы «Эббот»: Эффективность, % = (N1 - N2) / N1 x 100 

Результаты
В трех образцах крови, собранных перед первой обработкой, концентрации микрофилярий варьировали от 500 до 33 583 МФ/мл (таблица 2). У собак в контрольной группе через 3 дня после нанесения минерального масла концентрации МФ варьировали от 500 до 36 450 МФ/мл, в то время как у собак в группе лечения концентрации варьировали от 54 до 7700 МФ/мл. Через неделю после первой обработки у собак в контрольной группе концентрации варьировали от 200 до 33 600 МФ/мл, тогда как у собак, обработанных препаратом Адвокат® для собак, концентрации снизились до значений от 0 до 648 МФ/мл. К моменту второй обработки в ДИ 28 у собак в контрольной группе концентрации варьировали от 200 до 27 500 МФ/мл, в то время как у собак в группе лечения концентрации варьировали  от 0 до 30 МФ/мл, причем микрофилярии обнаруживались у 5 собак из 11. В ДИ 42 (последний день взятия образцов) микрофилярии были обнаружены только у одной собаки в группе лечения (17 МФ/мл), тогда как в контрольной группе все собаки остались положительными с концентрациями от 250 до 27 450 МФ/мл. Исходя из логарифмического преобразования по основанию 10 числа МФ, 3-кратное логарифмическое снижение циркулирующих МФ было достигнуто к ДИ 14, а в ДИ 42 у собак, обработанных препаратом Адвокат® для собак, МФ почти полностью отсутствовали (рис. 1).
Данные показывают, что в ДИ 28 и 42 концентрация МФ у собак из группы лечения была статистически снижена по сравнению с собаками контрольной группы, при этом у 10 из 11 контрольных собак в 42-й день исследования концентрация МФ составляла более 300 МФ/мл. В ходе данного исследования у собак в группе лечения концентрация МФ снизилась более чем на 99 % к ДИ 7 после однократного наружного применения препарата Адвокат® для собак в сравнении с собаками в контрольной группе, которых обработали минеральным маслом; при этом снижение концентрации микрофилярий более чем на 99 % сохранялось до ДИ 42 (таблица 3). У собак, обработанных препаратом Адвокат® для собак, в  ДИ 28  и 42  было обнаружено значительно меньше микрофилярий, чем у контрольных собак (p < 0,05).

Нежелательных явлений, которые можно было бы считать связанными с лечением, не наблюдалось.

Обсуждение
Препарат Адвокат® для собак является уникальной комбинацией инсектицида имидаклоприда и эндоэктоцида моксидектина, которая обеспечивает широкий спектр действия, направленного против внутренних и внешних паразитов при этом компонент моксидектин демонстрировал высокую эффективность в отношении широкого спектра стадий и видов кишечных нематод (Cruthers и соавт, 2008), включая микрофилярии D. immitis (Hendrix и соавт., 1992). Была доказана эффективность препарата на основе комбинации имидаклоприд 10%/моксидектин 2,5% в лечении собак, пораженных микрофиляриями D. repens (Hellman и соавт., 2011; Traversa и соавт., 2011). Большинство профилактических препаратов против дирофиляриоза собак не выпускаются в дозах, предназначенных для полного уничтожения микрофилярий (Bowman и Atkins, 2009). Доказано, что в более низкой дозе (3 мкг/кг массы тела) моксидектин не оказывает выраженного микрофилярицидного действия, но в более высокой дозе воздействует на МФ после повторного нанесения (Hendrix и соавт., 1992). Следовательно, необходимо увеличить дозировку макроциклических лактонов, поскольку микрофилярии, как правило, менее восприимчивы к ним, чем неполовозрелые (L3, L4) личинки филярий (Bowman, 2012).

Рис. 1. Среднее значение (и 95% доверительный интервал) логарифма по основанию 10 числа микрофилярий на 1 мл крови в двух группах по 11 собак В одной группе (красные круги) собак дважды обработали препаратом Адвокат® для собак, в другой группе (зеленые квадраты) собак дважды обработали плацебо (минеральное масло). Местная обработка проводилась в дни исследования 0 и 28; вертикальные линии на цифрах 0 и 28 по оси Х обозначают дни, когда проводилась обработка.

Таблица 3. Среднее геометрическое число микрофилярий и процентный показатель эффективности у собак, обработанных препаратом Адвокат® для собак или минеральным маслом. Первая обработкабыла проведена в 0-день, вторая — на 28-й день.

День исследования

Адвокат® для собак

Плацебо

Процентный показатель

эффективности*

-8

7526,4

3826,7

Н/П

-7

4199,1

5968,9

Н/П

-6

3728,2

352,7

Н/П

-5

3117,9

4454,0

Н/П

-4

4551,5

4200,7

Н/П

1

3593,1

4231,7

15,1

2

1706,2

5048,8

66,2

3

980,5

3657,8

73,2

7

19,1

3451,6

99,4

14

2,4

3260,0

99,9

21

1,8

4103,8

100,0

28

2,7

4172,4

99,9**

29

0,6

2596,3

100,0

35

1,5

4376,5

100,0**

42

0,3

3906,4

100,0

Н/П = неприменимо; * эти значения были округлены

** При использовании отдельного ковариационного анализа для каждого дня исследования логарифмы числа МФ статистически значимо различались между двумя группами (p < 0,05) 


Рис. 2 Растровая микрофотография микрофилярии Dirofilaria immitis

В данном исследовании при обработке собак, пораженных циркулирующими МФ D. immitis, препаратом Адвокат®  для собак в ДИ 0 и 28 концентрация микрофилярий снизилась более чем на 99 % в ДИ 7 после однократной обработки в сравнении с собаками в контрольной группе и осталась сниженной более чем на 99 % вплоть до ДИ 42. В группе животных, обработанных препаратом Адвантейдж® Мульти для собак, логарифмы числа МФ были значительно ниже в ДИ 28 и 42 (p < 0,05) при использовании отдельного ковариационного анализа для каждого дня исследования в сравнении с этими же значениями у собак в контрольной группе. Результаты данного исследования доказывают, что раствор для наружного применения на основе комбинации имидаклоприд 10 % / моксидектин 2,5% (Адвокат®  для собак) эффективен в отношении циркулирующих МФ D. immitis у положительных по дирофиляриозу собак с 1 или 2 степенью дирофиляриоза сердца, при этом у собак не наблюдается нежелательных явлений, связанных с проводимым лечением.

Моксидектин представляет собой высоколипофильный макроциклический лактон, который накапливается в основном в жировых тканях (Al-Azzam и соавт., 2007) и достигает высоких концентраций в плазме крови с постепенным выведением из организма хозяина (Blagburn и соавт., 2009). Несмотря на то, что авермектины и милбемицины содержат родственные макроциклические лактоны, они обладают разной эффективностью, активностью и фармакокинетикой (Prichard и Roulet, 2005). Некоторые авермектины и моксидектины обладают уникальными свойствами, которые допускают использование более гибких схем лечения. Больший период полураспада и профиль безопасности моксидектина позволяет включать его в препараты длительного действия (Prichard и соавт., 2012); по этой причине моксидектин вызвал интерес в качестве филярицида (Geary и Mackenzie, 2011). В предыдущем исследовании, в ходе которого собакам хирургически трансплантировали взрослых особей дирофилярий (10 половозрелых самцов и 10 половозрелых самок) (Pepper strain, TRS Labs Inc., Афины, штат Джорджия, США), концентрация микрофилярий у животных, обработанных препаратом Адвокат®  для собак, снизилась на 99,9% после двукратной обработки в сравнении с контрольной группой, хотя не все получившие лечение собаки были полностью избавлены от МФ в ДИ 42 (McCall и соавт., 2014). Аналогичным образом не все собаки были избавлены от МФ в клиническом полевом исследовании, подробно описанном в находящемся в свободном доступе резюме   (Supplemental NADA 141–251, одобрено 24 октября 2013). Это полевое исследование включало в общей сложности 181 собаку из шести штатов, которых использовали для оценки эффективности препарата Адвокат®  для собак в качестве микрофилярицида. Около 50% собак вместе с адюльтицидной терапией получили сопутствующее микрофилярицидное лечение. Схема лечения включала в себя однократную инъекцию меларсомина дигидрохлорида за две недели (ДИ -14) до первого нанесения препарата Адвокат®  для собак (ДИ 0), две дополнительные инъекции меларсомина дигидрохлорида в течение двух дней подряд через две недели после первого нанесения препарата Адвокат®  для собак (ДИ 14 и 15) и последнюю обработку препаратом Адвокат®  для собак через две недели после введения меларсомина дигидрохлорида (ДИ 28). В полевом исследовании подсчет числа МФ для оценки эффективности проводили в ДИ -14, 28 и 42. Хотя не все собаки в полевом исследовании были избавлены от микрофилярий, общая эффективность двух обработок препаратом Адвокат®  для собак в отношении снижения концентрации МФ была очень высокой: 99,3% и 99,5% в ДИ 28 и 42 соответственно.

Со стороны ветеринарных врачей было бы разумно удостовериться в устранении МФ после обработки препаратом Адвокат®  для собак, чтобы свести к минимуму риск передачи этих МФ другой собаке через комариный укус. Кроме того, было бы интересно выяснить, могут ли МФ появиться повторно, если прекратить лечение собаки, пораженной взрослыми гельминтами, после одной или нескольких очевидно успешных обработок препаратом Адвокат®  для собак.

Этические стандарты

Исследование проведено в соответствии с рекомендациями руководства VICH GL 9 по надлежащей клинической практике, протоколом исследования и упоминаемыми в протоколе СОП, а также в соответствии с применимыми действующими местными и федеральными законами и нормативами.

Источники финансирования

Данное исследование финансировала компания «Байер ХелсКэа ЛЛС» (отдел ветеринарии, Шони, штат Канзас, США). 

Заявление о конфликте интересов

Сэмюэл Д. Чарльз, Роберт Дж. Артер и Терри Сеттье являются сотрудниками компании «Байер ХелсКэа». Дуайт Д. Боумен не имеет известных конфликтов интересов с данным исследованием.

Благодарность

Авторы выражают признательность Майклу Ульриху (Michael Ulrich) (собачий питомник «Cheri Hill Kennel and Supply Inc.») за участие в проведении исследования.

 

Литература

  1. Al-Azzam SI, Fleckenstein L, Cheng KJ, Dzimanski MT, McCall JW (2007) Comparison of the pharmacokinetics of moxidectin and ivermectin after oral administration to beagle dogs. Biopharm Drug Dispos 28: 431–438

  2. American Heartworm Society 2014 Current canine guidelines for the diagnosis, prevention and management of heartworm (Dirofilaria immitis) infections  in  dogs. Available  at   http:// www.heartwormsociety.org/veterinary-resources/canine- guidelines.html#7.

  3. Arther RG, Bowman DD, Slone RL, Travis LE (2005) Imida- cloprid plus moxidectin topical solution for the prevention of heartworm disease (Dirofilaria immitis) in dogs. Parasitology Res 97 (suppl.1): 76–80.
  4. Blagburn BL, Dillon AR, Arther RG, Butler JM, Newton JC (2011) Comparative efficacy of four commercially available heartworm preventive products against the MP3 laboratory strain of Dirofilaria immitis. Vet Parasitology 176: 189–194.

  5. Bowman DD (2009) Diagnostic Parasitology. In: Georgis’ Parasitology for Veterinarians, 9th Edition. Elsevier, St. Louis, pp 318.

  6. Bowman DD, Atkins CE (2009) Heartworm biology, treat- ment and control. Vet Clin Small Anim 39: 1127–1158.

  7. Bowman DD (2012) Heartworm, macrocyclic lactones, and the specter of resistance to prevention in the United States. Parasites and Vectors 5: 138.

  8. Cruthers LR, Arther RG, Basel CL, Charles SD, Hostetler JA, Settje TL (2008) New developments in parasite prevention. Bayer selected proceedings. NAVC 2008 Suppl Vet Forum 25(3B): pp 15–20.

  9. Geary TG, Mackenzie CD (2011) Progress and challenges in the discovery of macrofilaricidal drugs. Expert Rev Anti Infect Ther 9(8): 681–695.

  10. Hellmann K, Heine J, Braun G, Paran-Dobesova R, Svobo- dava V (2011) Evaluation of the therapeutic and preventive efficacy of 2.5 % moxidectin/10 % imidacloprid (Advocate®, Bayer Animal Health) in dogs naturally infected or at risk of natural infection by Dirofilaria repens Parasitology Res 109 (suppl.1): 77–86.

  11. Hendrix CM, Blagburn BL, Bowles JV, Spano JS, Aguilar R (1992) The safety of moxidectin in dogs with microfilariae and adults of Dirofilaria immitis. In: Soll, MD (ed) Pro- ceedings the American Heartworm Symposium Austin TX: pp 183–187.

  12. Louisiana State University School of Veterinary Medicine, Heartworm disease. 2015 available at: http://www1.vetmed. lsu.edu/VTHC/Shared %20Services/Shared %20 Services/…/ item41535.html.

  13. McCall JW, Arther R, Davis W, Settje T (2014) Safety and efficacy of 10% imidacloprid + 2.5% moxidectin for the treat- ment of Dirofilaria immitis circulating microfilariae in exper imentally infected dogs. Veterinary Parasitol 206: 86–92.

  14. Prichard R, Roulet A (2005) Moxidectin Pharmacodynamics: Impact on resistance mechanisms to macrocyclic lactones in laboratory and field strains of nematode parasites. In: Moxidectin: Continued innovation in parasite control 20th WAAVP: pp 19–26.

  15. Prichard R, Ménez C, Lespine A (2012) Moxidectin and the avermectins: Consanguinity but not identity. Int J Parasitol Drugs and Drug Resist 2: 134–153.

  16. Traversa D, Aste G, Di Cesare A, Paoletti B, Di Tommaso M, Di Giulio E, Pampurini F, Tunesi C, Boari A (2011) Efficacy of a single administration of a spot-on solution containing imidacloprid 10%/moxidectin 2.5 % in eliminating Dirofi- laria repens microfilariae in naturally infected dogs. 

 

 




Назад в раздел